PCR引物純化的方法有哪些呢?

健康 未結(jié) 2 923
楊俊語語il
楊俊語語il 2021-08-09 02:21
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2條回答
  • 2021-08-09 02:49

    采用OPC純化,制品純度大于90%。此級(jí)別制品可用作PCR引物,DNA測(cè)序引物、各種探針等。該級(jí)別只提供長(zhǎng)度在35mer以下的合成DNA制品。序列更長(zhǎng)時(shí),制品的純度得不到保證。

    采用PAGE純化,制品純度大于95%。如訂購(gòu)的DNA欲用作RT-PCR引物、各種探針,或用于PCR克隆測(cè)序、定點(diǎn)突變等,請(qǐng)選用PAGE純化制品。當(dāng)合成的DNA的序列較長(zhǎng)(≥40mer)時(shí),PAGE是最好的純化方法。

    采用HPLC純化,制品純度大于99%。由于制品純度非常高,使用本法純化的DNA制品可適用于各種基因工程實(shí)驗(yàn)。特別是:PCR克隆、定點(diǎn)突變、人工合成基因等。不過,本法只對(duì)純化較短序列(<40mer)特別有效,合成更長(zhǎng)序列(≥40mer)時(shí),請(qǐng)選擇PAGE純化制品。
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  • 2021-08-09 03:04

    有以下幾種方法:
    1.C18柱脫鹽:它對(duì)DNA有特異性的吸附,可以被有機(jī)溶解洗脫,但不會(huì)被水洗脫,這種方法一般不會(huì)對(duì)普通PCR反應(yīng)產(chǎn)生影響。對(duì)于需要用于測(cè)序、克隆的引物不能使用這個(gè)級(jí)別。

    2.OPC純化: OPC法純化的DNA純度大于95%。適用于40mer以下引物的純化。
    3.PAGE純:PAGE純化法是使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,對(duì)DNA片段進(jìn)行分離,然后從凝膠中回收目的DNA的方法。PAGE純化法也是一種非常有效的DNA純化方法,純化后的DNA純度大于95%,對(duì)長(zhǎng)鏈Oligo DNA (大于50mer)的純化特別有效。
    4.HPLC純化:HPLC純化是使用高效液相色譜的原理,對(duì)DNA片段進(jìn)行純化。純度可以大于99%。主要用于短鏈和修飾引物的純化。該法的弱點(diǎn)是成本較高,批量生產(chǎn)效率不高。
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